GcMAFの研究と参考文献

癌、HIVおよび免疫疾患の治療のためのGcMAF(Gcタンパク質由来マクロファージ活性化因子)

研究およびリファレンス

GcMAF(GCタンパク質マクロファージ活性化因子に由来します)

癌、HIVおよび免疫疾患の治療のために

研究およびリファレンス

テストレポート

血清中のGcMAFの14-JUN-2012安定性(PDF)

H向井、Y宇土。 生物科学技術、徳島大学の教室。

  • この実験は、マクロファージ、当社GcMAFs 2の貪食能の短期、長期貯蔵寿命と安定に、日本の徳島の大学で行われました。 世代を実証します。 結果は2ことを示しています。 1ºCで(4ºC程度)室温と14日で20日間7年40ºCための血清中の世代GcMAFは安定しています。
  • 本研究と関連する結果が唯一GcMAFに、当社の特許取得済みの生産プロセスにより調製された第二世代を、適用されますのでご注意ください、 それはより高い酸化傾向を有するので、ビタミンD親和性を用いて製造される従来のGcMAFは、第二世代GcMAFと同じ安定性を有していません。 安定性の違いは、異なる製造プロセスに起因するとGcMAF自体によるものではありません。

GcMAF貪食マクロファージ活性試験の第二世代

第二世代GcMAF徳島大学でマウスマクロファージおよびヒツジ赤血球を用いたマクロファージの食作用活性について試験されます。 赤血球は、オプソニン化、従って摂取及び破壊のために、活性化マクロファージのためにマークされています。 オプソニン化細胞は、明確な細胞内の紫色の領域として観察することができます。 この観察に基づいて、我々は、食作用(摂取)インデックス(PI)を計算します。

紫はGcMAFにより、活性化マクロファージをマークし、その後オプソニン化赤血球(ここでは白ペンキマークで)を取ります。

マウスのがんにin vivo実験で運ぶの予備的結果

担癌マウスのインビボ実験で第二世代GcMAF博士の方法で調製した精製GcMAFで処理しました 山本が行わ生理食塩水を使用しました。 2。 GcMAFを精製して生成がはるかに効果的として、これらの実験になりました。 (未発表の結果、徳島大学)。

GcMAFの研究を公開

一緒に日本で大学GcMAF徳島からの研究者との第二世代GcMAFのさらなる発展に取り組んでwiird。 以下は、徳島大学から昨年の10内で公開し、科学雑誌に掲載されているGcMAFの研究報告があります。 GcMAFに関する研究が進行し、他の出版物に将来につながります。

2010のビタミンD結合タンパク質は、SCIDマウスにおけるマクロファージ活性化因子のHCCを阻害します

K中山、N松浦、T兼松、H.藤岡、H・ナカヤマ、N松浦、兼松、H.藤岡。

  • 背景、 肝細胞癌の可能性の再発は、この治療のための最大の問題である。したがって、疾患の治療のための新たな戦略が必要です。 本研究の目的は、ビタミンD結合タンパク質のマクロファージ活性化因子(DBPmaf)はHCCの成長を阻害することができるかどうかを調査することでした。
  • 結論、 DBP-MAFは、少なくとも2つの新機能、マクロファージの活性化によって、すなわち抗血管形成活性および腫瘍破壊を有しています。 したがって、DBP-MAFは、HCCの治療のための潜在的な新しい戦略があります。

DBP-MAFの投与開始後2日から採取した図21代表腫瘍。 (用量:40のNG / kg /日)

治療開始後に腫瘍の体積(N = 3)10日における図21変化します。 試験群の腫瘍増殖を有意に制限し、一方、腫瘍は、対照群に未チェックの成長しました。

図4移植腫瘍HepG2内微細血管の数。 処置したマウスの腫瘍における微小血管の数は、未処理腫瘍より有意に低かったです。

著者のコメント:

肝細胞癌(HCC)は、世界で最も一般的な悪性腫瘍です。 HCCの治療のための治療の選択肢は限られており、多くの場合も、根治治療後に広がってから再発されています。 HCCを含む固形腫瘍は、食物と一緒に自分自身を供給し、それによって、十分な血管網を構築しなければなりません。 そのため、腫瘍の血管新生は、腫瘍の成長および増殖のための基本的な条件の一つです。

私たちは、ビタミンD結合タンパク質(DBP)は係数が血管新生阻害剤である活性化マクロファージを導出することを以前に報告しました。 これは、人間バッハ唾液腺癌細胞株BYPC-3の自然基づいて発見されました。

このインビボ研究はDBPmafは、SCIDマウスにxenografierten HCC細胞の腫瘍の進行を減少させることができることを示しています。 in vitroでの研究はまた、DBP-MAFは、少なくとも2つの生物学的機能を有することを示しています。 抗血管形成活性およびマクロファージ活性化の増強を含みます。

抗血管新生は腫瘍の退縮または少なくとも成長停止を誘導するための最も効果的な方法の一つです。 他の報告は、DBP-MAFは、抗血管新生され、マウスにおけるHCCの成長を阻害するという仮定を確認します。

レポートは、血清および腫瘍組織における肝細胞癌MVDとVEGFのレベルを増加させます。 ベバシズマブ(アバスチン、ヒト化抗VEGFマウスモノクローナル抗体)は、結腸癌の治療のために臨床的に使用されます。 いくつかの研究では、唯一の治療剤として、または高度なHCC患者では、細胞傷害性または分子配向剤と組み合わせてベバシズマブの使用を検討しました。 DBP-MAFは、VEGFシグナル伝達カスケードの阻害を介しベバシズマブと同様に、その抗血管新生効果を発揮することが示されています。 すべてのこれらの結果は、DBP-MAFが要求される作用機序に有望な血管新生阻害剤、及び更なる研究であることを示している表示します。

私たちの現在の研究では、DBP-MAFを移植HCC細胞および抗原が腫瘍抗原に細胞を提示するなど、活性化マクロファージを超えたマクロファージの大規模な浸潤を誘導することを示しています。 これらのマクロファージは、自然免疫細胞としてだけではなく行動でなく、樹状細胞として機能するように。

私たちは、HCC細胞にDBP-MAFのない抗増殖効果を見ていないという事実は、これはDBP-MAFは主に血管新生および活性化マクロファージによる腫瘍細胞の死滅を抑制することによって動作することを示しています。

我々は、皮下でSCIDマウスの治療は、腫瘍増殖抑制のためのDBP-MAFによってHepG2をリードしていることを初めて示しました。

2005 Gcのタンパク質(ビタミンD結合タンパク質):GcのジェノタイピングとGcMAFベースアクティビティ

H長澤、Y宇土、H佐々木、N岡村、村上、S久保、クル・カーク、H堀。

要約、 Gcのタンパク質(ヒトグループ固有の成分 (GC)、ビタミンD結合タンパク質又はGC-グロブリン)、ビタミンD輸送に参加し、その保管、細胞外G-アクチンの洗浄、C5aの走化性活性の増加を含む重要な生理的機能を有しますガラクトサミン(GalNAc修飾Gcのタンパク質(GcMAF)によって媒介される炎症およびマクロファージの活性化好中球のために。この概要は、GCタンパク質の構造および機能は、主にGcの遺伝子型とGcMAFベース活性に関して検討されることを示します。 「創薬のターゲットとしてGcMAF」研究戦略の議論は、当社独自の研究に基づいています。

マクロファージ活性化因子の2004協会(MAF)ビタミンD結合タンパク質における多型を有するベース活性(PDF)

H長澤、S咲、Y宇土、S久保、H堀。

要約、 背景。 血清ビタミンD結合タンパク質(GCタンパク質またはDBP)は、炎症-präparierendenマクロファージ活性化因子(GcMAF)の前駆体の炭水化物処理反応のカスケードによって高度に発現される多型タンパク質です。 Gcの多型とGcMAFベース活性の関係を解明するために、我々は、それらの炭水化物部分の処理によりからホモGcのタンパク質Gc1f-1F、Gc1s-1SとGc2-2 3種類の貪食能を推定しました。

プロセス、 私たちは、等電点電気泳動によるヒト血清サンプルのGC-タイピング中心(IEF)を行いました。 ヒト血清からのGcタンパク質は25ヒドロキシD3セファロースを用いたアフィニティークロマトグラフィーによって精製しました。 ベータ - グリコシダーゼおよびシアリダーゼを使用して変更Gcのタンパク質の食作用アッセイを行いました。

結果、 豆からbeta1-4-結合特異ガラクトシダーゼを用いて基材GcMAF活性を分析することによってGc1F-1F表現型がGalbeta1-4GalNAc結合を含有することが示されています。 Gc1F-1F表現型のGcMAFベース活性は、三のGcのホモ・タイプのうち最も高かったです。

結論、 Gcの多型とGCタンパク質の炭水化物様々な多面的効果のために重要です。

Gcのタンパク質由来のマクロファージ活性化因子(GcMAF)および腫瘍性マクロファージ活性におけるその機能的役割(PDF)から人間の2003特性

Sモハマド、堀H、H長澤、K碓井、Y宇土。

はじめに、 マクロファージは、体の免疫システムに不可欠なとBedrohung信号に対する免疫応答に重要な役割を果たしています。 マクロファージはまた、抗腫瘍免疫において重要な役割を有することが知られている腫瘍に潜入することができ、したがって、ほとんどの腫瘍部位で見つけることができます。 一方、GC-血清タンパク質が原因マクロファージ活性化因子の前駆体としての多機能特性に(ビタミン結合タンパク質知らD3としても知られている)を印加します。 Gcのタンパク質は、強力なマクロファージ活性化因子(GcMAF)、N-アセチルガラクトサミン(GalNAc)変換残部が糖成分を有するタンパク質にT細胞によって誘導BガラクトシダーゼおよびB細胞のノイラミニダーゼであってもよいです。

活性化マクロファージは、腫瘍細胞、活性酸素種(ROS)の放出及び反応性窒素種(RNS)の組み込みによって腫瘍活性を発現する、またはその両方。 私たちは、ことを報告しました その場でβ-ガラクトシダーゼおよびノイラミニダーゼを用いるGCタンパク質の修飾は、マウスの腹膜マクロファージからのチオグリコレートでスーパーオキシドの放出を増加させます。 Yamamotoら。 癌の治療のための免疫調節剤としてGcMAFを使用する可能性を示しました。 したがってGcMAFためのアッセイの必要性。 河南ら。 ヒト血清からGcMAFの定量分析について報告しました。 GcMAFの糖度は、質的に検討していませんでした。 ここでは、精製されたヒト血清からGcMAFの定性分析に関する研究およびマクロファージ活性に対するその効果を提示します。

等電点電気泳動パターンおよび腫瘍活性(PDF):Gcのタンパク質由来のマクロファージ活性化因子(GcMAF)から2003

Sモハマド、長澤H、Sサキ、Y宇土、Y中川、K川島、H堀。

背景、 Gc1f、Gc1sとGc2、本電気泳動移動度に基づいて:GCタンパク質は、三体の表現型を有するGCタンパク質由来のマクロファージ活性化因子(GcMAF)の前駆体です。 電気泳動移動度の差は、糖部分の異なる翻訳後合成によるものです。

材料と方法。 我々は、(IEF)メソッドを等電点電気泳動に基づいてGcのタンパク質とGcMAFの間の電気泳動移動度の差を比較しました。 GcMAFで処理したマクロファージの腫瘍活性は、L-929細胞と共培養することにより評価しました。 腫瘍メカニズムを調査TNFバイオアッセイおよび一酸化窒素(NO)放出とされています。

結果、 Gcのタンパク質とGcMAFsの電気泳動移動度の差を検出することができました。 GcMAF処理されたマクロファージの腫瘍活性が検出されたが、TNFおよびNOのNO放出を示しませんでした。

結論、 モビリティの等電点電気泳動の違いは、ときGcのタンパク質とGcMAFはGcMAF検出方法を開発することに有用である可能性があります。 GcMAFは、マクロファージ腫瘍活性を増加させました。 しかし、TNFおよびNO放出メカニズムに関与していませんでした。

2002腫瘍細胞のα-N-アセチルガラクトサミニダーゼ活性およびGcMAF関連マクロファージ活性化(PDF)への関与

Sモハマド、長澤H、Y宇土、H堀。

要約、 癌患者の血清中のα-N-アセチルガラクトサの蓄積(アルファ - Nagalase)、最終的に実証された進行癌患者において免疫抑制をもたらすGcMAF誘導性のマクロファージ活性化カスケードの前駆体であるGcのタンパク質の脱グリコシル化。

私たちは、いくつかのヒト腫瘍細胞株のアルファNagalaseの生化学的特性を調べました。 また、GcMAFマウス腹腔マクロファージの有効性に影響を有効にするために調べました。 これらは、スーパーオキシドの活性化後にGcMAFによって開始され、マクロファージの活性化カスケード中に生成されることになります。

ヒト結腸腫瘍細胞株HCT116、ヒト肝癌細胞株HepG2、および正常ヒト肝細胞(チャンレーバー細胞株)からのα-NaGalasesの比活性は、基質の二種類を用いて評価しました。 GalNAcアルファ-PNP(エキソ - 基質)およびGal-β-のGalNAcアルファ-PNP(エンド - 基質)。

腫瘍由来アルファ - Nagalaseが上ノルマルアルファ - Nagalaseよりも高い活性を有し、エンド基質としてエキソ型基板に高い基質特異性を有し、pH7での活性を保持していました。 GcMAFはGcMAFによる腫瘍細胞溶解液の前処理は、活性を低下させる、請求マウスマクロファージのスーパーオキシド産生を増強しました。

我々は、腫瘍由来のα-Nagalaseは通常チャン肝細胞からのα-Nagalase正常と比較生化学的特徴が異なると結論付けています。 加えて、腫瘍細胞のα-Nagalase由来するマクロファージに対するGcMAFの活性化能を低下させます。

Gcのタンパク質由来のマクロファージ活性化因子(GcMAF)、その構造の特徴付けおよび生物学的活性(PDF)の2002調製

Sモハマド、長澤H、Y宇土、H堀。

要約、 背景。 GCタンパク質はでGCタンパク質由来のマクロファージ活性化因子(GcMAF)の前駆体である炎症マクロファージ活性化カスケードによってトリガー。 T細胞によるB細胞の誘導可能なβ-ガラクトシダーゼおよびノイラミニダーゼはGcMAFをGCタンパク質を変換します。

結果、 我々は成功し、ヒト血清からのGcタンパク質を掃除しています。 GcMAFはLektinblottingによって検出され、高い生物活性を示しました。

結論、 我々の結果は、GcMAF媒介マクロファージ活性化カスケードにおける末端N-アセチルユニットおよびヒト血清における構成GcMAFの存在の重要性をサポートしています。 これらの予備的データは、分子GcMAFsの設計のために重要です。

GC-MAFのその他発表された研究

子宮内膜症の病因における遺伝的危険因子としてのビタミンD結合タンパク質で2011多型(PDF)

K繊維長、G・ゴールダラー、L・クレムザー、H・リンドナー、B・コフィン、L・ワイルド、B・シーバー。

要約、 以前の研究では、子宮内膜症をenwickeln女性における炎症反応の欠如を示しています。 特異的な免疫学的欠陥は、まだ完全には説明できません。

客観、 私たちの目標は、血清中のタンパク質発現の違いを識別し、次に近い子宮内膜症の病態生理に輝いていました。

方法、 横断研究は、大学病院で開催されたと2003 2005と腹腔鏡検査の間で受けている女性を調べました。 これらの患者は、原因の痛みおよび/または不妊または選択科目卵管結紮に手術を受けた女性歳18-49年でした。 血液は、術前に採取しました。

アクションの主な成果、 血清のプロテオーム解析は、2次元Differenzgelelektrophoreseによって行われました。

結果、 私たちは、急性期タンパク質と補助コンポーネントを含む、子宮内膜症とコントロールを持つ女性との存在に有意な差と25のタンパク質スポットを発見しました。 ビタミンD結合タンパク質の数は、対照プールと比較して約3倍全て子宮内膜症プールに高かったです。 ナノスケール液体クロマトグラフィー - エレクトロスプレーイオン化質量分析法を用いて特定Allelproduktenの分析は、それが血清プールおよび子宮内膜症の女性の個々の検証サンプルにおいてより濃縮したGC * 2-Allelproduktであることを示しました。 簡単に強力なマクロファージ因子(GCタンパク質由来のマクロファージ活性化因子)に変換することができるGC * 1-Allelproduktとは対照的に、これは事実上存在しないGC * 2-Allelproduktあります。

結論、 私たちは(子宮内膜症で共通)インプラントにGC * 2多型を着る人たちとのマクロファージの活性化の貪食機能の欠如は、腹腔に可能性子宮内膜組織が作成されますことを疑います。 女性の大規模集団における子宮内膜症の危険因子が必要とされているように、特定のビタミンD結合タンパク質多型を評価するための今後の研究。

著者のコメント:

子宮内膜症は、生殖年齢の女性の一般的な疾患です。 それは女性の約10%と不妊と女性の40%以上に影響を与えます。 子宮内膜症の女性は、彼らの免疫系障害および炎症反応の障害を有していてもよく、そのためには、子宮内膜症の病変を開発します。

私たちの最も印象的な発見は、DBPの特定の対立遺伝子、より正確にGC * 2対立遺伝子の変化する周波数です。 GC * 2-Allelproduktsの発現は、すべての子宮内膜症プール3倍で対照群より高かったです。

DBPは、ビタミンD代謝物のための担体、Gcのタンパク質由来のマクロファージ活性化因子(GcMAF)の形態におけるマクロファージの最も強力な活性化因子としての役割に加えてあります。 GC * 1-Allelproduktが10-30%以下の割合でグリコシル化されている間GC * 2-Allelprodukte%が1-5の合計速度でグリコシル化されています。 これはほとんど符号化されたGC * 1対立遺伝子で行わないのに対し、このように、GC * 2アレルDBPによってコードされるタンパク質の形状は、GcMAFに変換はるかに容易です。

唯一のGC * 2-Allelproduktenを有する患者は不釣り合い子宮内膜症グループで表現し、重要なマクロファージ活性化因子を変換するGcMAFでDBPへ大幅に削減能力を持っています。

私たちの研究の結果に基づいて、我々は、少なくとも部分的にマクロファージの貪食機能を有効にするGC'2対立遺伝子にできないことである免疫不全を示唆しています。

影響を受けた女性では特異的免疫療法によるマクロファージの活性化は、子宮内膜症のための新たな治療戦略の基礎を形成することができます。

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